一、靛基質(吲哚)試驗
將被檢菌接種到蛋白胨培養基中，36±1培養18h～24h后，沿試管壁滴加數滴吲哚試劑于培養物液面，觀察結果。
出現紅色者為陽性，出現黃色者為陰性。
1、試驗原理：
大腸桿菌能分解蛋白質中的色氨酸，產生靛基質(吲哚)，靛基質與對二甲基氨基苯甲醛結合，形成玫瑰色靛基質(紅色化合物),為陽性結果。
2、三糖鐵試驗：
將被檢菌穿刺接種三糖鐵瓊脂，36±1培養18h～24h后，觀察結果。
大腸桿菌反應為：斜面產酸，底層產酸，不產H2S。
二、氰化鉀試驗（KCN)
取少量被檢菌分別接種到氰化鉀生化實驗管、氰化鉀實驗對照生化管中，于36±1培養18-24h后，觀察結果。實驗管和對照管均生長為陽性。實驗管不生長，對照管生長者為陰性。
大腸桿菌KCN試驗為陽性。
三、尿素酶實驗
將被檢菌接種到尿素酶生化管中，于36±1培養18h～24h后，觀察結果。尿素酶溶液變紅為陽性，不變色或者變黃色為陰性。
大腸桿菌尿素酶為陰性。
