上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮組織，故上皮細胞培養特別受到重視。但上皮細胞培養中常混雜有成纖維細胞，培養時生長速度往往超過上皮細胞，并難以純化，同時上皮細胞難以在體外長期生存，因此純化和延長生存時間是培養關鍵。

體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜，因此培養在有膠原的底物上可能利于生長，另外人或小鼠表皮細胞培養在以3T3細胞為飼養層（用射線照射后）時，細胞易生長并可發生一定程度的分化現象。降低PH、Ca2+含量和溫度，向培養基中加入表皮生長因子，均有利于表皮細胞生長。

以表皮細胞為例，用皮膚表皮和真皮分離培養法可獲得純上皮細胞，其法如下（黑木凳志夫 1981）
1、取材：外科植皮或手術殘余皮膚小塊，早產流產兒皮膚更好，取角化層薄者，切成0.5－1平方厘米小塊。
2、置0.02%EDTA中，室溫，5分鐘。
3、換入0.25%胰蛋白酶中，4℃過夜。
4、分離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子將表皮與真皮層分開。
5、取出表皮，剪成更小的塊后，置0.25%胰酶中，37℃，30—60分鐘。
6、反復吹打，制成懸液。
7、培養：用80目不銹鋼紗網濾過后，低速離心，吸去上清。
8、直接加入培養基（Eagle加20%小牛血清）制成細胞懸液，接種入培養瓶，CO2溫箱培養。