狗腎細(xì)胞(MDCK(NBL-2))介紹：1958 年九月S.H. Madin and N.B. Darby 從一只外觀正常的成年雌性英國(guó)小獵犬的腎分離等到MDCK 細(xì)胞株。角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色呈陽(yáng)性。MDCK 被用于研究β-粥樣蛋白前體的處理及其蛋白水解產(chǎn)物。

狗腎細(xì)胞(MDCK(NBL-2))特性：

1） 來(lái)源：狗腎

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

細(xì)胞接受后的處理：

1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25 瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3）棄去T25 瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養(yǎng)基。

4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養(yǎng)基。

5）接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

狗腎細(xì)胞(MDCK(NBL-2))用途：僅供科研使用。

明舟生物（mingzhoubio）的狗腎細(xì)胞(MDCK(NBL-2))培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備MEMα培養(yǎng)基(MEMα， GIBCO，貨號(hào)12561-056)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL 培養(yǎng)基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml 此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml 離心管中，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml 培養(yǎng)基的T-25 培養(yǎng)瓶中或含有14ml 培養(yǎng)基的T-75 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3 步驟進(jìn)行，最后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻，按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中。明舟生物（mingzhoubio）按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106 個(gè)細(xì)胞凍存。