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人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞(MUM2B)

人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞(MUM2B)特性:

1 來源:人眼色素層黑色素瘤

2 形態(tài): 多角,貼壁細胞

3 含量:>1x106 /mL

4 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

3)收到細胞后請拍照,3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞(MUM2B)用途:僅供科研使用。    

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(45X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h

4 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5 懸浮細胞T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議12傳代

人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞(MUM2B)培養(yǎng)步驟

一.人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞(MUM2B)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1 準備1640培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%20mM  Hepes;雙抗,1%

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3 凍存細胞:凍存細胞時,用FBS重懸細胞,然后加入一定量的DMSO,輕輕混合均勻后移入到凍存管中,DMSO終濃度為10%

二. 細胞處理:

1 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4 . 收到細胞后首次傳代推薦將細胞懸液按12的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:21:4的比例進行。

3細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類;

1細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1-2ml胰酶(含EDTA),細胞變圓脫落后,加入2-3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

24min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和等體積的凍存液,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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