| 產(chǎn)品名稱 |
hFOB1.19 |
| 商品貨號 |
MZ-1996 |
| 中文名稱 |
人成骨細(xì)胞 |
| 規(guī)格 |
T25 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 特征特性 |
在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達(dá)載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。在許可溫度33.5oC下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細(xì)胞極少分裂或不分裂。這些細(xì)胞具有分化為表達(dá)造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。這些細(xì)胞提供了一個(gè)同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化，造骨細(xì)胞生理和激素，生長因子，和對造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。 |
| 培養(yǎng)條件 |
DMEM/F12+0.3mg/mlG418+10%FBS |
| 傳代方法 |
消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿 |
| 凍存條件 |
無血清細(xì)胞凍存液 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
