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人關節(jié)滑膜成纖維細胞(關節(jié)炎)
人關節(jié)滑膜成纖維細胞(關節(jié)炎)
規(guī)格:
貨期:
編號:MZ-4140
品牌:Mingzhoubio
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商品簡介
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產品名稱
人關節(jié)滑膜成纖維細胞(關節(jié)炎)
商品貨號
MZ-4140
組織來源
關節(jié)炎;關節(jié)組織;人
規(guī)格
5×105cells/T25培養(yǎng)瓶
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
成纖維細胞樣
細胞污染
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
細胞描述
滑膜是關節(jié)囊的內層,淡紅色,平滑閃光,薄而柔潤,由疏松結締組織組成。關節(jié)腔內的所有結構,除關節(jié)軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關節(jié)腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。 滑膜分泌滑液,在關節(jié)活動中起重要作用。正常滑膜分為兩層,即薄的細胞層(內腔層)和血管層(內膜下層),是血管豐富的關節(jié)囊內膜,貼附于非關節(jié)面部分,覆蓋于關節(jié)囊內的骨面上,不在軟骨面上,此部分稱為邊緣區(qū)或“裸區(qū)”。滑膜呈粉紅色,光滑發(fā)亮、濕而潤滑,有時可見絨毛,內含膠原性纖維。 滑膜細胞有A、B兩型。巨噬細胞樣A型細胞,表面有絲狀偽足、漿膜內陷、囊泡、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體,具有吞噬功能;B型成纖維 樣滑膜細胞(FLS) ,有高濃度的內質網(wǎng)結構,是介導 RA 關節(jié)破壞的主要細胞。
細胞傳代步驟
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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