| 產(chǎn)品名稱 |
大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞 |
| 商品貨號 |
MZ-715 |
| 組織來源 |
SD大鼠（出生2-3周），5-7只 |
| 規(guī)格 |
5×105cells/T25培養(yǎng)瓶 |
| 生長特性 |
貼壁 |
| 細(xì)胞形態(tài) |
成纖維細(xì)胞樣 |
| 培養(yǎng)基 |
DMEM高糖培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、平滑肌細(xì)胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 細(xì)胞描述 |
哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，目前我國有約 2000 萬人罹患哮喘。近些年，由于霧霾等空氣質(zhì)量與環(huán)境污染程度的日益惡劣，呼吸系統(tǒng)疾病也逐漸成為了全世界范圍影響人類健康最嚴(yán)重的慢性疾病之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2025年，世界上將會有 4 億人患上哮喘。哮喘發(fā) 病 癥 狀 眾 多，早 期 表 現(xiàn) 為 過 敏 性 炎癥，后期由于氣管平滑肌增生，阻塞氣管，導(dǎo)致氣道狹窄、氣道高反應(yīng)及氣道重塑，患者出現(xiàn)胸悶、氣喘等癥狀，嚴(yán)重時危及生命。因此，對哮喘的發(fā)病機理與治療的研究是至關(guān)重要的。在對哮喘發(fā)病機制的研究中，氣管平滑肌是針對氣道阻塞性癥狀的主要研究目標(biāo)之一，針對氣 管 平 滑 肌 細(xì) 胞 ( airway smooth muscle cells，ASMCs) 的形態(tài)學(xué)觀察與細(xì)胞增殖速率的測量是在細(xì)胞生物學(xué)水平研究哮喘發(fā)病機制的常用手段。 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
